1. 本文章主要研究方向
?研究方向?：本文主要研究了熱休克蛋白gp96（也被稱為Hsp90B1或Grp94）在調(diào)節(jié)自然殺傷（NK）細(xì)胞發(fā)育、成熟和功能中的作用，特別是通過穩(wěn)定轉(zhuǎn)錄因子Eomesodermin（Eomes）來影響NK細(xì)胞的抗腫瘤免疫。
?原文期刊及DOI?：本文發(fā)表在《Nature Communications》上，DOI為10.1038/s41467-024-45426-5。
2. 期刊影響因子
Nature Communications 影響因子：16.6
3. ZETA life轉(zhuǎn)染試劑（AD600150）在實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用
轉(zhuǎn)染試劑型號(hào)：Advanced DNA RNA Transfection Reagent（貨號(hào)：AD600150）
轉(zhuǎn)染細(xì)胞及基因：
? 原代小鼠NK細(xì)胞：轉(zhuǎn)染Eomes過表達(dá)質(zhì)粒（用于驗(yàn)證Eomes對(duì)DX5表達(dá)的挽救效應(yīng)）。
? HEK293細(xì)胞：
? 轉(zhuǎn)染Flag-gp96和His-Eomes（驗(yàn)證gp96對(duì)Eomes穩(wěn)定性的調(diào)控）。
? 轉(zhuǎn)染HA-Trim28和Myc-Eomes（研究Trim28介導(dǎo)的Eomes泛素化降解）。
? 轉(zhuǎn)染siRNA靶向Trim28（驗(yàn)證Trim28對(duì)Eomes蛋白水平的調(diào)控）。
4. 轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及貢獻(xiàn)分析
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)定位
1. 原代NK細(xì)胞轉(zhuǎn)染Eomes（Fig.5E）：
? 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：通過轉(zhuǎn)染Eomes過表達(dá)質(zhì)粒，恢復(fù)gp96缺陷型NK細(xì)胞中DX5的表達(dá)。
? 結(jié)果：DX5+ NK細(xì)胞比例顯著回升（p=0.0117），證明Eomes是gp96調(diào)控NK成熟的關(guān)鍵下游因子。
2. HEK293細(xì)胞轉(zhuǎn)染gp96與Eomes（Fig.6G）：
? 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：過表達(dá)gp96增強(qiáng)Eomes的蛋白穩(wěn)定性。
? 結(jié)果：CHX處理后，gp96組Eomes半衰期延長(zhǎng)（p<0.05），證實(shí)gp96抑制Eomes降解。
3. HEK293細(xì)胞轉(zhuǎn)染Trim28與Eomes（Fig.7C,7E）：
? 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：Trim28過表達(dá)導(dǎo)致Eomes蛋白減少及Lys63泛素化增強(qiáng)。
? 結(jié)果：Trim28組Eomes降解加速（p<0.01），泛素化水平升高（p<0.001）。
5.轉(zhuǎn)染試劑的核心貢獻(xiàn)
? 高效遞送能力：成功轉(zhuǎn)染難轉(zhuǎn)染的原代NK細(xì)胞（轉(zhuǎn)染效率>60%），為功能挽救實(shí)驗(yàn)提供技術(shù)保障。
? 多場(chǎng)景適用性：支持HEK293細(xì)胞中外源基因（gp96、Trim28、Eomes）的共轉(zhuǎn)染及siRNA沉默實(shí)驗(yàn)，確保機(jī)制研究的完整性。
